肿瘤突变抗原或病毒抗原在细胞内被呈递致表面，才会被T细胞所识别，这是细胞免疫的普遍现象之一。如果突变/病毒抗原没有经过从胞内到胞外的过程，T细胞识别呈递抗原的结果也不会实现。
外显子测序数据中蕴含的大量肿瘤新抗原有巨大的探索潜力，通过工程化可控地将每种目标突变高表达地呈递给T细胞，从而评估突变作为新抗原的潜力，这对于肿瘤新抗原发现具有重要价值。
TMG载体可高通量、批量化地使细胞呈递突变抗原肽给T细胞，而后使用ELISpot、四聚体检测、细胞杀伤实验、NF-AT/KB报告基因法、T细胞免疫表型检测等方法评估T细胞活化效应。
原理
由于测序获得的SNV或融合基因等基因在体内表达的水平参差不齐，TMG载体将所有突变序列高通量地集中于统一的高表达启动子下游，使其可控性一致性高表达，并定向转运至内质网供MHC结合并被MHC-I/II呈递到细胞表面。TMG载体实现肿瘤新生抗原筛选的具体过程是:
1. 将突变对应的DNA序列装入表达载体，每个载体装入12段突变DNA序列，每段突变DNA序列可翻译为25个氨基酸的抗原肽。假如外显子测序发现240种突变，构建20个TMG载体，每个载体装入12段突变DNA序列。
2. 载体转染工程化呈递细胞，将TILs或PBMC中的淋巴细胞与转染后细胞共培养，而后使用ELISPOT方法、细胞杀伤实验、NF-AT/KB报告基因法、T细胞免疫表型检测等方法检测T细胞活化效应。
3. 通过两轮筛选确定激活T细胞分泌IFN-gamma最多的抗原肽类型，第一轮筛选发现高反应性载体，第二轮筛选从高反应性载体中筛选高反应性抗原肽，并通过四聚体荧光流式检测定位最主要的抗原肽。
客户提供
突变列表：包含基因名称、突变氨基酸类型、位置。最好含有HLA信息，可减少筛选的范围从而降低成本。
服务交付
- TMG载体DNA 5nmol，每TMG载体最多可装载12段抗原DNA序列
2. TMG载体图谱
3. (可选) TMG转染的工程化K562细胞：该细胞与PBMC或TILs共培养后可诱导出持续杀伤性记忆T细胞。成功转染TMG的工程化K562细胞经流式检测鉴定。
4. (可选)TMG活化的T细胞及其活性检测结果：该T细胞来自于TMG转染的工程化K562细胞与PBMC中T细胞共培养，除交付TMG活化的T细胞外，还将交付检测结果，其中含CD69、CD45RA流式检测结果，NF-AT报告基因法检测结果。若TMG中含免疫原性抗原，则该细胞与PBMC共培养后可诱导出持续杀伤性记忆T细胞。
服务周期
TMG载体最短制备时间为7天，根据装载的抗原DNA数量会有适当工时延长；
TMG转染的工程化K562细胞：3天；
TMG活化的T细胞及其检测结果：7天。
应用案例
1、批量化鉴定了多种肿瘤突变抗原肽，这些抗原肽对肿瘤浸润淋巴细胞具有显著杀伤效应。
Efficient identification of mutated cancer antigens recognized by T cells associated with durable tumor regressions. Clin Cancer Res, 2014
2、 筛选获得胃癌突变抗原肽，并构建mRNA疫苗，成功实现体外免疫杀伤效应
mRNA vaccine–induced neoantigen-specific T cell immunity in patients with gastrointestinal cancer. J Clin Invest, 2020
参考性综述
Adoptive T Cell Therapy for Solid Tumors: Pathway to Personalized Standard of Care. Cells, 2021
Monitoring of neoantigen vaccine-induced immune responses .Nature Reviews Clinical Oncology, 2021