服务目标
针对用户提供的配对TCR序列，本服务将完成从构建TCR-T细胞到TCR-T细胞抗原特异性活化状况检测的全部工作。
适用范围
最优应用场景：TCR具有对应的pMHC，即TCR的目标抗原清晰。通过TCR-T的功能评估，可确定该TCR-T靶向pMHC阳性细胞的活化能力和杀伤能力。
基本场景：没有清晰的目标抗原，仅有含抗原的呈递细胞(PBMC或肿瘤细胞)情况下，通过TCR-T的功能评估，可确定该TCR-T被呈递细胞活化的活化能力和杀伤效能。
服务内容
第一步：构建TCR-T
使用具有二硫键的TCR恒定区，保障目标TCR复合物配对表达于细胞膜表面。根据用户提供的配对TCR序列构建TCR-T，根据T细胞的不同，可构建：
1、使用Jurkat T细胞构建；
可选：敲除内源性TCR的Jurkat T、未敲除内源性TCR的Jurkat T；
2、使用敲除内源性TCR的原代 T细胞构建；
可选：敲除内源性TCR的原代 T细胞、未敲除内源性TCR的原代 T细胞。
第二步：功能检测
1、抗原特异性检测：使用pMHC荧光四聚体通过流式检测TCR-T细胞的含量，从而判断TCR-T的靶向抗原特性；
2、报告基因检测：具有通过TCR-T携带的NF-AT报告基因，在目标抗原刺激情况下，使用报告基因法检测NF-AT激活状态，从而客观评估目标抗原对TCR-T的免疫活化能力。报告系统有荧光素酶报告基因法、GFP报告基因法任选。
3、细胞活化的表面蛋白流式检测：CD69-pMHC荧光四聚体双阳性检测。CD69仅在T细胞活化后表达，静止状态的T细胞不表达。CD69是在体外刺激试验中鉴定抗原反应性T细胞的理想标志。CD69也是细胞共刺激信号，CD69+T细胞可促进IFN-γ产生。